Правила ветеринарно-санитарной экспертизы меда

1 Область применения

1. Настоящие Правила обязательны для выполнения на всей территории Приднестровской Молдавской Республики исполнительными органами государственной власти, организациями, независимо от их организационно-правовых форм и форм собственности, должностными лицами и гражданами, в том числе индивидуальными предпринимателями.

2. Общие положения

2. Мёд — это сладкий продукт, производимый медоносными пчелами из нектара растений или секреции живых частей растений, или выделений паразитирующих насекомых на живых частях растений, которые пчела собирает, преобразует, смешивая с особыми производимыми ею веществами, откладывает, сушит, накапливает и оставляет в сотах для созревания и достижения нужной кондиции.

3. Мед подлежит обязательной ветеринарно-санитарной экспертизе в соответствии с требованиями настоящих Правил.

4. Ветеринарно-санитарную экспертизу меда проводят специалисты лаборатории ветеринарно-санитарной экспертизы, специалисты ветеринарной лаборатории.

5. Реализация меда через магазины, ларьки, киоски, павильоны, бутики и другие объекты в независимости от форм собственности и ведомственной подчинённости разрешается только в фасованном виде при наличии качественного удостоверения, ветеринарного свидетельства (ветеринарной справки), сертификата соответствия.

3 Ветеринарно-санитарные требования

6. Мед транспортируют в чистых, сухих, без постороннего запаха транспортных средствах. Хранится мед в чистых сухих помещениях, не имеющих специфических запахов, изолированно от пылящих и ядовитых веществ. Помещение должно быть защищено от проникновения мух, пчел, ос, муравьев и др.

7. Для реализации на рынках, лаборатории ветеринарно-санитарной экспертизы рынков принимают на экспертизу и выпускают в продажу мед при наличии у владельца ветеринарно-санитарного паспорта пасеки с отметкой о благополучии по инфекционным и инвазионным болезням пчёл.

8. Владельцы меда обязаны доставлять для продажи мед в чистой таре из допущенных материалов, (нержавеющая сталь, алюминиевые сплавы, стекло, эмалированная посуда и дерево, кроме дуба и хвойных пород деревьев). Мед, доставленный в загрязненной или не в соответствующей указанным выше требованиям таре, экспертизе не подлежит.

9. Сотовый мед принимают на экспертизу запечатанным не менее чем на две трети площади сот. Соты должны быть однородного белого или желтого цвета.

4 Отбор проб

10. Пробы для анализа отбирают работники лаборатории в присутствии владельца меда согласно методам, изложенным в Приложении № 1 (раздел 1) настоящих Правил, из каждой доставленной емкости.

11. Для исследования отбирают разовые пробы меда массой 100 г из каждой доставленной единицы, при определении массовой доли водыареометром масса пробы меда удваивается.

12. Пробы меда в рамках отбирают из каждой пятой соторамки размером 5х5 см. Пробы сотового меда, удаленного из рамок, берут в тех же размерах от каждой упаковки.

13. При проведении дополнительных исследований меда в ветеринарной лаборатории проба должна быть не менее 500 г. При этом пробу меда опечатывают, одну половину направляют в ветеринарную лабораторию (исследуют в ветеринарной лаборатории), а вторую хранят до получения результатов исследования (в качестве контроля).

14. Посуда для отбираемых проб должна отвечать санитарным требованиям.

5 Порядок проведения ветеринарно-санитарной экспертизы

15. Для определения качества меда лаборатории ветеринарно-санитарной экспертизы на рынках и ветеринарные лаборатории проводят исследования по следующим показателям:

а) органолептические данные (цвет, аромат, вкус, консистенция и кристаллизация);

б) массовая доля воды;

в) присутствие оксиметилфурфурола (ОМФ);

г) дистазная (амилазная) активность;

д) определение цветочной пыльцы;

е) общая кислотность;

ж) массовая доля редуцирующего сахара;

з) содержание сахарозы (по показаниям);

и) наличие механических примесей (по показаниям);

к) содержание радиоактивных веществ (при необходимости, проводят специалисты ветеринарной лаборатории);

л) определение антибиотиков (при необходимости, проводят специалисты ветеринарной лаборатории)

м) определение возбудителей заразных болезней пчел (при необходимости, проводят специалисты ветеринарной лаборатории)

16. Мед натуральный по органолептическим показателям должен соответствовать следующим требованиям:

17. Физико-химические показатели меда должны отвечать следующим ветеринарно-санитарным требованиям:

18. При получении сомнительных показателей (недостаточно выражена органолептика, низкая ферментативная активность, отклонение общей кислотности менее 1 или более 4 и редуцирующего сахара) проводят дополнительные качественные исследования на сахарозу и другие примеси согласно методам, изложенным в приложении.

19. При экспертизе сотового меда определяют органолептические показатели, соотношение открытых и запечатанных сот, наличие сахарного меда, признаков брожения, присутствие в сотах расплода (в случае выявления — удаляют).

20. Поступившие на ветеринарно-санитарную экспертизу пробы меда и результаты их исследования регистрируют в журнале установленной формы.

21. На таре с медом, прошедшим ветеринарно-санитарную экспертизу на рынке и признанным годным в пищу и продажу (признанным доброкачественным), должны быть наклеены специальные этикетки (зеленого цвета для натурального и желтого для падевого). На этикетках должно быть крупным шрифтом обозначено «Выпущено в продажу», а также указаны наименование и количество продукта, фамилия владельца (продавца), номер экспертизы, дата, время и подпись лица, разрешающего продажу продукта (Приложение № 2). На мед, прошедший ветеринарно-санитарную экспертизу в ветеринарной лаборатории, выдается результат исследования.

22. Мед, нереализованный в течение дня и несданный для хранения, подлежит повторной экспертизе.

23. Запрещается продажа меда, не прошедшего ветеринарно-санитарную экспертизу и меда, признанного недоброкачественным.

24. Основанием для признания меда недоброкачественным служит следующее:

а) несоблюдение правил транспортировки и хранения (пункт 6 настоящих Правил);

б) несоответствие тары санитарным требованиям (пункт 8 настоящих Правил);

в) несоответствие органолептических показателей (пункт 16 настоящих Правил);

г) превышение содержания массовой доли воды;

д) диастазная активность ниже установленной;

е) массовая доля редуцирующего сахара менее указанного в пункте 17 настоящих Правил;

ж) признаки брожения;

з) механические примеси;

и) фальсификация всех видов;

к) присутствие антибиотиков;

л) сотовый мед, расфасованный в малообъемную тару или в виде палочек, упакованный в целлофан.

25. Если мед признан недоброкачественным, его подвергают денатурации, о чем составляют акт по форме согласно Приложению № 3. Акт составляют, в двух экземплярах, один экземпляр вручают владельцу, а другой хранят в делах лаборатории.

6 Контроль и ответственность за выполнение настоящих правил

26. Контроль за выполнением настоящих Правил возлагается на Государственную ветеринарную службу и иные органы государственной власти в пределах компетенции, установленной действующим законодательством Приднестровской Молдавской Республики.

27. Ответственность за выпуск в торговлю меда на рынке, не прошедшего ветеринарно-санитарную экспертизу, несет администрация (владелец) рынка.

28. Ответственность за нарушение настоящих Правил устанавливается действующими нормативными правовыми актами Приднестровской Молдавской Республики.

Приложение № 1

к Правилам ветеринарно-санитарной экспертизы меда в Приднестровской Молдавской Республике

Методы отбора проб и определение органолептических и физико-химических показателей

1. Отбор проб

1. Пробы меда отбирают трубчатым пробоотборником из нержавеющей стали, алюминия или его сплавов диаметром 10 — 12 мм, погружая его до дна или на всю длину рабочего объема. Пробоотборник извлекают, дают стечь меду с наружной поверхности и затем мед сливают из пробоотборника в специально подготовленную чистую и сухую посуду.

2. Закристаллизованный мед из тары отбирают коническим щупом длиной не менее 500 мм с прорезью по всей длине. Щуп погружают под углом от края емкости вглубь и извлекают его с одновременным вращением. Чистым сухим шпателем отбирают верхнюю и нижнюю части содержимого щупа.

3. Сотовый мед принимают на экспертизу, если он запечатан и не закристаллизован. Пробы меда из рамок вырезают ножом. После удаления восковых крышечек (забруса) образец помещают на сетчатый фильтр с диаметром ячеек 1 — 2 мм и ставят в термостат при температуре 40 — 45 градусов C.

2. Определение органолептических показателей меда

4. Определение цвета. Мед наливают в пробирку или цилиндр из бесцветного стекла (если мед закристаллизован, его предварительно распускают на водяной бане при температуре 40 — 45 градусов C). Цвет меда определяют визуально при дневном освещении.

5. Определение аромата. В стеклянный бюкс (стакан) помещают 30 — 40 г меда, закрывают крышкой и нагревают на водяной бане при температуре 40 — 45 градусов C в течение 10 мин. Бюкс извлекают из бани, снимают крышку и делают короткий вдох через нос.

6. Определение вкуса. Для оценки вкуса меда оптимальной температурой считается 30 градусов C, поэтому пробу перед исследованием подогревают на водяной бане.

7. Определение консистенции. Консистенцию определяют погружением шпателя в мед, имеющий температуру 20 градусов C, шпатель извлекают и оценивают характер стекания меда:

а) жидкий мед — на шпателе небольшое количество меда, стекающего мелкими частыми каплями;

б) вязкий мед — на шпателе значительное количество меда, стекающего редкими, вытянутыми каплями;

в) очень вязкий мед — на шпателе значительное количество меда, который при стекании образует длинные тяжи;

г) мед плотной консистенции — шпатель погружается в мед под давлением.

3. Определение массовой доли воды в меде

8. Определение ареометром. Метод основан на свойстве водных растворов меда изменять плотность в зависимости от его массовой доли:

а) аппаратура, материалы, реактивы (Ареометр со шкалой от 1,080 до 1,160. Термометр ртутный стеклянный до 100 градусов C с ценой деления шкалы 1 градус C. Цилиндр мерный вместимостью 250 см3. Стакан химический мерный вместимостью 500 см3. Вода дистиллированная);

б) подготовка к испытанию. Приготовление раствора меда 1:2. 100 г меда растворяют в 200 см3 дистиллированной воды при температуре 30 — 40 градусов C, а затем охлаждают до 15 — 25 градусов C;

в) проведение испытания. В цилиндр наливают 200 — 250 см3 раствора меда 1:2 и определяют температуру. Если температура раствора выше 25 градусов C или ниже 15 градусов C, его охлаждают или нагревают. Затем в цилиндр опускают ареометр, исключая его соприкосновение со стенками. Через 10 — 15 сек. учитывают показания прибора и по таблице № 1 находят величину массовой доли воды.

 

Таблица № 1

Определение массовой доли воды по плотности его водных растворов при температуре 15 — 25 градусов C

9. Определение массовой доли воды по индексу рефракции.

Метод основан на зависимости показателя преломления меда от содержания массовой доли воды:

а) аппаратура, материалы (Рефрактометр с ценой деления шкалы показателя преломления не более 1*10**(-3). Баня водяная с электрообогревом. Термометр ртутный стеклянный до 100 градусов C и ценой деления 1 градус C. Стеклянные бюксы. Стеклянные палочки);

б) подготовка к испытанию. Подготовка пробы меда. Для определения используют жидкий мед. Закристаллизованный мед помещают в стеклянный бюкс, плотно закрывают крышкой и нагревают на водяной бане при температуре 60 градусов C до жидкого состояния. Затем бюкс охлаждают до комнатной температуры. Воду, сконденсировавшуюся на внутренней поверхности бюкса, и массу меда тщательно перемешивают стеклянной палочкой;

в) проведение испытания. Каплю сиропообразного меда наносят на нижнюю призму рефрактометра и измеряют показатель преломления;

г) обработка результатов. Полученный показатель преломления пересчитывают на массовую долю воды по таблице № 2.

Таблица № 2

Определение массовой доли воды в меде по индексу рефракции

4. Определение амилазной (диастазной) активности

10. Определение активности амилазы (диастазы) основано на способности этого фермента расщеплять крахмал, что определяют иодной реакцией. Данный показатель выражают амилазным (диастазным) числом (ед. Готе).

11. Аппаратура, материалы, реактивы (Баня водяная с электрообогревом. Весы лабораторные общего назначения 4 кл. Пробирки стеклянные диаметром 20 мм и высотой 200 мм. Стаканы химические вместимостью 50 и 100 см3. Колбы мерные вместимостью 100, 200 см3. Пипетки мерные вместимостью 1, 2, 5, 10 см3. Крахмал растворимый, ч. Натрий хлорид, ч. Иод кристаллический, ч. Калий иодид, ч. Дистиллированная вода).

12. Подготовка к испытанию:

а) приготовление раствора меда массовой концентрации 100 г/дм3 в пересчете на сухие вещества проводят по формулам 1 и 2

(1)                    X = (m * B) / C, где

X — количество раствора меда заданной концентрации в пересчете на сухие вещества, см3; m — масса навески меда, г; B — количество сухих веществ в меде, %; C — заданная концентрация раствора меда, %.

(2)                    X1 = X — m , где

X1 — количество дистиллированной воды для приготовления меда массовой концентрации 100 г/дм3, см3; X — количество раствора меда заданной концентрации в пересчете на сухие вещества, см3; m — масса навески меда, г.

б) приготовление раствора натрия хлорида массовой концентрации 5,8 г/дм3. 0,58 г натрия хлорида помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют дистиллированной водой и доводят объем до метки.

в) приготовление раствора иода. 1 г калия иодида помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, добавляют 40 — 50 см3 дистиллированной воды, взбалтывают, затем вносят 0,5 г иода, растворяют и доводят дистиллированной водой объем до метки.

г) приготовление раствора крахмала массовой концентрации 10 г/дм3. 1 г растворимого крахмала размешивают в стаканчике вместимостью 50 см3 с 20 см3 дистиллированной воды и количественно переносят в коническую колбу, где несильно кипит 80 см3 дистиллированной воды. Кипятят 2 — 3 мин., затем колбу охлаждают до 20 градусов C, содержимое количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят до метки.

д) проведение испытания. В 10 пробирок разливают раствор меда и другие компоненты согласно таблице № 3.

Таблица № 3

Компоненты реакционной смеси при определении амилазной (диастазной) активности

Пробирки закрывают пробками, тщательно перемешивают содержимое, помещают в водяную баню на 1 час при температуре (40 ±1) градусов C. Вынимают из водяной бани, охлаждают под струей воды до комнатной температуры, после чего в каждую пробирку вносят по одной капле раствора иода.

е) оценка результатов. Первая пробирка слева, в которой образуется желтоватая окраска, соответствует амилазной (диастазной) активности в исследуемом меде.

13. Определение предельного амилазного (диастазного) числа. Предельным амилазным (диастазным) числом называется минимальная амилазная (диастазная) активность, установленная настоящими Правилами. При исследовании белоакациевого, липового, подсолнечникового, хлопчатникового медов определение ведут по пробирке № 10 таблице № 3, остальных видов — по пробирке № 7.

14. Определение амилазного (диастазного) числа по подпункту д) пункту 16 настоящего приложения можно ускорить за счет снижения концентрации раствора крахмала. Использование раствора крахмала массовой концентрации 2,5 г/дм3 позволяет сократить продолжительность инкубирования в водяной бане до 10 мин.

5. Определение цветочной пыльцы

15. Сущность метода заключается в идентификации зерен пыльцы.

16. Аппаратура, материалы, реактивы (Микроскоп световой биологический. Центрифуга электрическая. Весы лабораторные общего назначения 4 кл. Центрифужные пробирки. Стаканы химические вместимостью 100 см3. Петля бактериологическая. Предметные стекла. Покровные стекла. Спирт этиловый ректификованный массовой долей 96%. Дистиллированная вода).

17. Проведение испытания. 20 г меда растворяют в 40 см3 дистиллированной воды. Тщательно перемешивают, переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют в течение 15 мин. с частотой вращения 10 — 50 с ** (-1). После центрифугирования жидкость сливают, а каплю осадка переносят петлей на предметное стекло. Стекло либо покрывают покровным стеклом, либо после подсыхания фиксируют содержимое каплей спирта. Закристаллизованный мед помещают на подогретое до 50 — 60 градусов C предметное стекло.

18. Оценка результатов. Идентификацию пыльцевых зерен производят по качественным признакам в соответствии с рис. 1, 2. (рисунки 1, 2 не приводятся.)

6. Определение общей кислотности

(Кислотность меда выражается нормальными градусами (миллиэквивалентами) — количество см3 0,1 н раствора натрия гидроокиси, пошедшее на титрование 100 г меда).

19. Аппаратура, материалы, реактивы (Весы технические лабораторные общего назначения. Колбы конические вместимостью 250 см3. Колбы мерные вместимостью 50 см3. Бюретка вместимостью 25 см3 с ценой деления 0,1 см3. Натрий гидроокись, раствор 0,1 н, фиксанал. Фенолфталеин, чда. Спирт этиловый ректификованный массовой долей 96%. Дистиллированная вода).

20. Подготовка к испытанию:

а) приготовление раствора меда массовой концентрации 100 г/дм3 согласно подпункта а) пункту 12 настоящего приложения.

б) приготовление спиртового раствора фенолфталеина массовой концентрации 10 г/дм3. 1 г фенолфталеина помещают в колбу вместимостью 100 см3 и доводят до метки этиловым ректификованным спиртом массовой долей 96%. Хранят в закрытом сосуде из темного стекла при комнатной температуре не более 1 мес.

21. Проведение испытания. В химический стакан отмеряют 100 см3 раствора меда массовой концентрации 100 г/дм3, прибавляют 5 капель спиртового раствора фенолфталеина массовой концентрации 10 г/дм3 и титруют 0,1 н раствором гидроокиси натрия до слабо-розового окрашивания.

22. Оценка результатов. Количество см3 0,1 н раствора натрия гидроокиси, израсходованное на титрование 100 см3 раствора меда массовой концентрации 100 г/дм3, равно числу нормальных градусов (миллиэквивалентов) кислотности. Расхождение между параллельными определениями не должно превышать ± 0,02 нормального градуса. Кислотность меньше единицы характерна для медов при скармливании пчелам сахарного сиропа, больше четырех — при искусственной инверсии.

7. Определение оксиметилфурфурола

23. В результате гидролиза тростникового (свекловичного) сахара посредством кислот, часть фруктозы разрушается с образованием оксиметилфурфурола. Оксиметилфурфурол с резорцином в кислой среде дает соединения, окрашенные в красный цвет разной интенсивности.

24. Аппаратура, материалы, реактивы (Вытяжной шкаф. Весы лабораторные общего назначения 4 кл. Ступки фарфоровые диаметром 70 мм. Чашки фарфоровые диаметром 50 мм. Резорцин. Эфир для наркоза. Кислота соляная х.ч., концентрированная).

25. Проведение испытания. В фарфоровую ступку помещают 4 — 6 г меда, добавляют 5 — 10 см3 эфира и тщательно растирают пестиком, эфирную вытяжку сливают в фарфоровую чашку (часовое стекло) и добавляют 5 — 6 кристалликов резорцина (его можно вносить в ступку в процессе приготовления вытяжки). Эфир выпаривают при комнатной температуре под тягой. Затем на сухой остаток наносят 1 — 2 капли концентрированной соляной кислоты (уд. вес 1,125).

26. Оценка результатов. Зеленовато-грязную или желтую окраску оценивают как отрицательную реакцию. Оранжевая или слабо-розовая свидетельствует о слабоположительной реакции (наблюдается при прогревании меда). Красная или вишнево-красная указывает, что мед содержит примесь искусственно инвертированного сахара или фальсификат в чистом виде.

8. Определение механических примесей

27. Аппаратура, материалы (Сушильный шкаф. Термометр ртутный стеклянный со шкалой 100 градусов C с ценой деления 1 градус C. Химический стакан вместимостью 200 — 250 см3. Сетка металлическая с диаметром ячеек не более 1 мм).

28. Проведение испытания. На металлическую сетку, положенную на стакан, помещают 50 г меда. Стакан ставят в сушильный шкаф, нагретый до 60 градусов C (при отсутствии шкафа мед нагревают до 60 градусов С на водяной бане).

29. Оценка результатов. Мед должен пройти через сетку без видимого остатка. При обнаружении механических примесей мед подлежит очистке отстаиванием.

9. Определение редуцирующих сахаров

30. Метод основан на восстановлении растворами Фелинга редуцирующих сахаров в меде и их последующего определения иодометрическим титрованием.

31. Аппаратура, материалы, реактивы (Весы аналитические. Баня водяная. Термометр ртутный стеклянный с пределами измерения от 0 до 100 градусов C с ценой деления 1 градус C. Колбы мерные вместимостью 50, 100, 250, 500 см3. Секундомер. Воронки. Фильтры. Асбестовая сетка. Пипетки вместимостью 5 и 10 см3. Натрий тиосульфат, 0,1 н раствор, фиксанал. Сегнетовая соль (C4H4KNa6 * 4H2O), ч. Серная кислота, х.ч. Пентагидрат сульфата меди (CuSO4 * 5H2O), ч. Крахмал. Калий иодид, ч. Натрий гидроокись, ч).

32. Подготовка к испытанию:

а) приготовление стандартных растворов:

1) раствор Фелинга 1 — 34,63 г пентагидрата сульфата меди растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 500 см3 и доливают до метки при температуре 20 градусов C. Раствор готовят перед использованием;

2) раствор Фелинга 2 — 173 г сегнетовой соли растворяют в 250 см3 дистиллированной воды и фильтруют в мерную колбу вместимостью 500 см3;

3) отдельно растворяют 50 г гидроокиси натрия в 100 см3 дистиллированной воды, вносят в мерную колбу с раствором сегнетовой соли и доводят до метки дистиллированной водой;

б) приготовление раствора крахмала массовой концентрации 10 г/дм3. 1 г крахмала размешивают в стаканчике вместимостью 50 см3 с 20 см3 дистиллированной воды и количественно переносят в коническую колбу с кипящей дистиллированной водой в объеме 80 см3;

в) приготовление раствора калия иодида массовой концентрации 500 г/дм3. 50 г калия иодида помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доливают дистиллированной водой до метки;

г) приготовление раствора серной кислоты массовой концентрации 200 г/дм3 согласно «Справочнику ветеринарного лаборанта — химика», Е.А. Васильева, 1975;

д) приготовление раствора меда. 1 г меда взвешивают с погрешностью не более 0,001 г в стеклянном стакане вместимостью 100 см3, растворяют его в 50 см3 дистиллированной воды, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят объем до метки дистиллированной водой и хорошо перемешивают (раствор А). Определение проводят немедленно после приготовления раствора меда.

33. Проведение испытания. В колбу вместимостью 50 см3 вносят по 10 см3 растворов Фелинга 1 и 2 и раствора меда (раствор А), после чего объем доводят до 50 см3 дистиллированной водой. Затем переносят в колбу вместимостью 250 см3, нагревают ее на асбестовой сетке. Кипение должно быть умеренным и продолжаться ровно 2 мин., после чего колбу охлаждают под струей холодной воды. Добавляют 5 см3 раствора иодида калия массовой концентрации 500 г/дм3 и 10 см3 серной кислоты массовой концентрации 200 г/дм3. Колбу закрывают, перемешивают и помещают в темное место. Через 5 мин вносят раствор крахмала массовой концентрации 10 г/дм3 и титруют раствором 0,1 н тиосульфата натрия. Параллельно проводят контрольный опыт, используя дистиллированную воду вместо раствора меда. Исследования проводят в двух повторностях.

34. Обработка результатов. По разности объемов 0,1 н раствора тиосульфата натрия, пошедшего на титрование испытуемой пробы и контрольной, в таблица № 4 находят соответствующее количество редуцирующего сахара в мг.

Пример. На титрование опытного и контрольного образцов пошло соответственно 5,7 см3 и 27 см3 раствора тиосульфата натрия, по разнице (27 — 5,7) = 21,3 см3. По таблице № 4 21,3 см3 соответствует 74,5 мг редуцирующего сахара в пробе. Содержание редуцирующего сахара в процентах вычисляем по формуле:

X = A / M x 100 , где

A — редуцирующий сахар, мг;

M — масса пробы, мг.

Расхождение результатов двух параллельных определений не должно превышать 0,02 %.

Таблица № 4

Определение редуцирующих сахаров, мг

10. Определение массовой доли сахарозы

(Метод заключается в определении разности процентного содержания редуцирующего сахара до и после кислотного гидролиза)

35. Аппаратура, материалы, реактивы (Для испытания применяют аппаратуру, материалы и реактивы, указанные в пункте 31 настоящего приложения со следующими дополнениями: пипетка вместимостью 25 см3; кислота соляная, х.ч., концентрированная; фенолфталеин, чда; спирт этиловый ректификованный массовой долей 96%).

36. Подготовка к испытанию:

а) приготовление раствора натрия гидроокиси массовой концентрации 400 г/дм3. 40 г гидроокиси натрия помещают в колбу вместимостью 100 см3, растворяют дистиллированной водой и объем доводят до метки;

б) приготовление спиртового раствора фенолфталеина массовой концентрации 10 г/дм3 проводят согласно подпункта б) пункта 20 настоящего приложения;

в) проведение испытания. 50 см3 раствора меда (исходного раствора А), приготовленного по подпункту а) пункта 32 настоящего приложения, помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, нагревают на водяной бане в течение 2 — 3 мин. до температуры 65 — 70 градусов C, добавляют 5 см3 концентрированной соляной кислоты. Температуру поддерживают в течение 5 мин. Затем раствор быстро охлаждают и нейтрализуют раствором натрия гидроокиси массовой концентрации 400 г/дм3 в присутствии спиртового раствора фенолфталеина массовой концентрации 10 г/дм3 в качестве индикатора до изменения окраски. Объем раствора доводят до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают. Из полученного раствора отбирают пипеткой 20 см3 и определяют содержание редуцирующего сахара по пункту 33 настоящего приложения. Параллельно проводят контрольный опыт с 50 см3 дистиллированной воды;

г) обработка результатов. Содержание сахарозы в процентах вычисляют умножением разности содержания редуцирующего сахара до (пункт 34 настоящего приложения) и после кислотного гидролиза на коэффициент 0,95.

11. Определение падевого меда

37. Спиртовая реакция:

а) аппаратура, материалы, реактивы (Пробирки стеклянные диаметром 7 мм, высотой 30 — 40 мм. Пипетки мерные вместимостью 1 и 10 см3. Спирт этиловый ректификованный массовой долей 96%);

б) проведение испытания. В пробирке смешивают 1 см3 водного раствора меда 1:1 и 8 — 10 см3 этилового ректификованного спирта массовой долей 96%. Содержимое пробирки перемешивают;

в) оценка результатов. Помутнение жидкости и выпадение хлопьев указывает о присутствии пади в меде.

38. Реакция с ацетатом свинца:

а) аппаратура, материалы, реактивы (баня водяная, термометр ртутный стеклянный до 100 градусов C с ценой деления 1 градус C, колба мерная вместимостью 100 см3, пипетка мерная вместимостью 1 см3, пробирки стеклянные диаметром 7 мм, высотой 30 — 40 мм, свинец ацетат, чда. Секундомер);

б) подготовка к испытанию. Приготовление раствора ацетата свинца массовой концентрации 250 г/дм3, 25 г ацетата свинца помещают в мерную колбу и доливают дистиллированной водой до 100 см3;

в) проведение испытания. В пробирку наливают 2 см3 водного раствора меда в соотношении 1:1, добавляют 2 см3 воды и 5 капель раствора ацетата свинца массовой концентрации 250 г/дм3, тщательно перемешивают и ставят в водяную баню при температуре 80 — 100 градусов C на 3 мин;

г) оценка результатов. Образование рыхлых хлопьев, выпадающих в осадок, свидетельствует о положительной реакции на падь.

12. Определение примеси свекловичной (сахарной) патоки

39. Аппаратура, материалы, реактивы (Весы лабораторные общего назначения 4 кл. Пробирки стеклянные диаметром 7 мм, высотой 30 — 40 мм. Колбы мерные вместимостью 100 см3. Пипетки вместимостью 1 и 5 см3. Капельница. Серебро нитрат, чда. Дистиллированная вода.)

40. Подготовка к испытанию:

а) приготовление раствора меда 1:2. 10 г меда растворяют в 20 см3 дистиллированной воды;

б) приготовление раствора нитрата серебра массовой концентрации 50 г/дм3. 5 г нитрата серебра помещают в колбу вместимостью 100 см3 и доливают дистиллированной водой до метки.

41. Проведение испытания. К 5 см3 водного раствора меда, приготовленного в соотношении 1:2, прибавляют 5 — 10 капель нитрата серебра массовой концентрации 50 г/дм3.

42. Оценка результатов. Помутнение смеси и появление осадка после внесения нитрата серебра указывает о присутствии в меде свекловичной патоки.

13. Определение крахмальной патоки

43. Аппаратура, материалы, реактивы (Весы лабораторные общего назначения 4 кл. Пробирки стеклянные диаметром 7 мм, высотой 30 — 40 мм. Пипетки вместимостью 1 и 5 см3. Колбы мерные вместимостью 100 см3. Барий хлорид, чда. Капельница. Фильтры. Дистиллированная вода).

44. Подготовка к испытанию:

а) приготовление раствора меда 1:2 проводят согласно подпункту а) пункта 40 настоящего приложения;

б) приготовление раствора бария хлорида массовой концентрации 100 г/дм3. 10 г бария хлорида помещают в колбу вместимостью 100 см3 и доливают дистиллированной водой до метки.

45. Проведение испытания. К 5 см3 профильтрованного через фильтр водного раствора меда, приготовленного в соотношении 1:2, по капле вносят раствор бария хлорида массовой концентрации 100 г/дм3.

46. Оценка результатов. Помутнение и выпадение белого осадка после внесения раствора бария хлорида свидетельствует о присутствии крахмальной патоки.

14 Определение крахмала и муки

47. Аппаратура, материалы, реактивы (Весы лабораторные общего назначения 4 кл. Пробирки стеклянные диаметром 7 мм, высотой 30 — 40 мм. Пипетки мерные вместимостью 2 и 5 см3. Йод, раствор 0,1 н, фиксанал. Дистиллированная вода).

48. Подготовка к испытанию. Приготовление раствора меда проводят согласно подпункту а) пункта 40 настоящего приложения.

49. Проведение испытания. 5 см3 раствора меда 1:2 нагревают в пробирке до кипения, охлаждают до комнатной температуры и прибавляют 3 — 5 капель 0,1 н раствора иода.

50. Оценка результатов. Появление синей окраски свидетельствует о присутствии в меде крахмала или муки.

15. Дополнительные методы исследования меда

51. Исследования меда на остаточные количества антибиотиков и обнаружение в нем возбудителей гнильцовых болезней проводят ветеринарные лаборатории, когда в ветеринарно-санитарном паспорте пасеки указано о неблагополучие ее по заразным болезням, обработке пчел антибиотиками и в случаях отравления пчел. Исследования также проводят при проверке кормовых запасов пчелиных семей, идущих в зимовку.

52. Исследование меда на наличие антибиотиков — в основе определения антибиотиков (стрептомицина, хлортетрациклина, неомицина и эритромицина) лежит принцип диффузии в агар. Отличие в их определении состоит в использовании различных тесткультур, сред и буфера:

а) для определения стрептомицина необходимы:

1) споры культуры Вас. Subtilis штамм 6633;

2) среда: раствор панкреатического гидролизата мяса (перевар Хоттингера), содержащий 33 мг % аминного азота, двузамещенный фосфат натрия 2-3 г, агар-агара 20г (рН среды 7,8-8,0);

3) буферный раствор: 1/15 М фосфатный буфер с рН 7,8-8,0 (состоящий из 11,612 г Na2HPO4 и 9,073 г NaH2PO4). Для приготовления буферного раствора можно использовать соли калия. Каждую навеску соли отдельно растворяют в 1000 мл дистиллированной воды в мерной колбе, а затем смешивают в соотношении 9,5 части двузамещенного фосфата натрия и 0,5 части однозамещенного фосфата натрия;

б) для определения хлортетрациклина необходимы:

1) споры культуры Вас. Subtilis штамм L2;

2) среда: раствор панкреатического гидролизата мяса (перевар Хоттингера), содержащий 100 мг % аминного азота, агар-агара 20 г (рН среды 6,1-6,2);

3) буферный раствор: цитратно-солянокислый с рН 5,0-5,2. Для приготовления буфера навеску лимоннокислого трехзамещенного натрия в количестве 8,6 г растворяют в 400-500 мл дистиллированной воды. В этот же раствор добавляют соляную кислоту (удельный вес 1,18-1,19) в количестве 5,6 мл. Затем доливают дистиллированной воды до 1000 мл. Все перемешивают и проверяют рН;

в) для определения неомицина необходимы:

1) споры культуры Вас. mycoides штамм 537;

2) среда: раствор панкреатического гидролизата мяса, содержащий 33 мг % аминного азота (рН среды 7,8-8,0);

3) фосфатный буфер (рН 7,8-8,0). Приготовление буферного раствора согласно подпункту а) пункта 53 настоящего приложения;

г) для определения эритромицина необходимы:

1) споры культуры Вас. mycoides штамм НВ;

2) среда: раствор панкреатического гидролизата мяса, содержащий 33 мг % аминного азота (рН 7,8-8,0);

3) фосфатный буфер (рН 7,8-8,0). Приготовление буферного раствора согласно подпункту а) пункта 53 настоящего приложения;

д) техника определения:

1) стерильные чашки Петри диаметром 90-100 мм с ровным плоским дном устанавливают на столе, отрегулированном по уровню;

2) в расплавленную, затем охлажденную до 45-48 0С среду вносят взвесь спор той культуры в зависимости о г того, на какой антибиотик исследуют мед, из расчета 20-30 млн. микробных тел на 1 мл среды. Среду со взвесью спор разливают по 10 мл в каждую чашку. После застывания засеянного агара на его поверхности на расстоянии около 28 мм от центра чашки вырезают 6 луночек тонкослойной стерильной трубкой с внешним диаметром 10 мм (для этой цели можно использовать трубку для пробочников № 4).

3) затем от исследуемой пробы в 3 пробирки берут по 1 г меда. В зависимости от того, какой антибиотик определяют, испытуемую пробу разводят соответствующим буфером в соотношении 1 : 5 и прогревают в водяной бане при 60 °С в течение 10 минут для устранения антибактериальных свойств меда. После остывания содержимого пробирок в 2 луночки вносят по 0,1 мл от каждой навески (для исследования одной пробы используют одну чашку). Чашки переносят в термостат, где их выдерживают 18-20 часов при 37 °С. По истечении указанного времени чашки просматривают. Наличие зоны угнетения вокруг луночек указывает на присутствие в меде антибиотика. Такой мед не допускается в продажу.

4) мед с наличием антибиотиков может быть использован в кондитерской промышленности, где применяют температурные режимы от 60-100 °С в течение 1,5 часа;

е) приготовление панкреатического гидролизата из мяса крупного рогатого скота см. в книге «Ветеринарная лабораторная практика», т. 1;

ж) определение аминного азота в панкреатическом гидролизате.

1) необходимые реактивы (0,2 н. раствор едкого натра; 0,2 н. раствор соляной кислоты; 0,5% -ный водный раствор бромтимолблау; формольная смесь, которую готовят следующим образом: к 50 мл 30-40% -ного формалина добавляют 25 мл 96%-ного этилового спирта и 5 мл спиртового раствора тимолфталеина (0,1%-ный раствор на 96%-ном спирте). Смесь нейтрализуют 1 н. раствором едкого натра до бледно-голубого окрашивания);

2) постановка реакции. Гидролизат мяса в колбе разводят дистиллированной водой до содержания 80-90 мг % аминного азота (например, 5 мл гидролизата доводят до 50 мл). В две колбы наливают по 5 мл разведенной исследуемой жидкости и в каждую добавляют по 20 мл дистиллированной воды. В одну колбу добавляют 2 капли раствора бромтимолблау, а затем кислотой или щелочью (в зависимости от рН основного гидролизата) доводят окраску до цвета травы. К содержимому второй колбы без индикатора прибавляют столько же кислоты или щелочи, сколько потребовалось для нейтрализации в колбе с индикатором, перемешивают и добавляют 0,5 мл формольной смеси. Содержимое колбы без индикатора взбалтывают и титруют 0,2 н. раствором едкого натра до голубого окрашивания. Расчет аминного азота в гидролизате проводят по формуле:

Х = A * К * 1,4 * 1000 * 10 / 5,

где X — количество аминного азота в исследуемом гидролизате, мг%;

А — объем 0,2 н. раствора едкого натра, израсходованного на титрование;

К — поправка титра 0,2 н. раствора едкого натра (например 0,19);

1,4 — коэффициент пересчета щелочи на аминный азот: 1 мл 0,1 н. раствора едкого натра соответствует 1,4 мг % аминного азота;

10 — разведение основного гидролизата (5 мл гидролизата до 50 мл дистиллированной воды);

5 — количество основного гидролизата, взятого для титрования, мл.

Пример расчета. На титрование 5 мл исследуемого гидролизата израсходовано 1,5 мл 0,2 н. раствора едкого натра (поправка титра 0,19). Отсюда содержание аминного азота будет:

Х = 1,5 * 0,19 * 1,4 * 1000 * 10 / 5 = 798,0 мг%.

Определение аминного азота в основном гидролизате повторяют 2-3 раза. Если же будет колебание показателей, то определяют средний показатель.

Из основного гидролизата Хоттингера готовят растворы с необходимым количеством аминного азота. Например, требуется приготовить раствор с содержанием 33 мг % аминного азота, а основной гидролизат содержит 798 мг % аминного азота. Сколько миллилитров основного гидролизата нужно взять для приготовления 1 л раствора с требуемым содержанием аминного азота?

Х = 33 * 1000 / 798 = 41,35 мл.

Следовательно для приготовления 1 л среды с содержанием 33 мг % аминного азота необходимо взять 41,35 мл панкреатического гидролизата мяса и добавить 958,65 мл дистиллированной воды. После добавления в нее компонентов рН среды доводят до 7,8-8,0 раствором щелочи 20%-ной концентрации. При определении хлортетрациклина рН среды 6,1-6,2 доводят 20%-ным раствором соляной кислоты.

з) приготовление тесткультур. Ампулу с высушенным штаммом вскрывают и в нее стерильно добавляют 0,5 мл дистиллированной воды. После полного растворения содержимое переносят пастеровской пипеткой в чашки Петри с 2%-ным мясо-пептонным агаром (рН 7,8-8,0) и 18-20 часов выращивают в термостате при температуре 37 °С. Затем отбирают колонии с характерными признаками для необходимой культуры, высевают на скошенный в пробирках 2%-ный мясо-пептонный агар и инкубируют 18-20 часов. Выращенную культуру смывают с поверхности агара и высевают в матрицы со средой, состоящей из 2,5 % агара, приготовленного на бульоне Хоттингера, содержащего 33 мг % аминного азота. Споры выращивают 10-12 суток при температуре 37 °С. После обнаружения в мазках в поле зрения микроскопа 90-95 % спор проводят смыв дистиллированной водой. Взвесь спор прогреваютпри температуре 65-70 °С в течение 30 минут и центрифугируют. Отмывание спор с последующим прогреванием проводят не менее трех раз. Из основной взвеси готовят рабочую взвесь по стандарту мутности 10.

53. Методы обнаружения возбудителей гнильцовых болезней в меде:

а) для проведения исследования необходимы следующие аппаратура и материалы:

1) люминесцентный микроскоп МЛ-2 с набором прилагаемых к нему фильтров или обычный биологический микроскоп (МБИ-1, МБИ-3, МБИ-4), оборудованный специальным люминесцентным устройством;

2) осветитель для возбуждения люминесценции препарата (источником света служит ртутная лампа СВД-250);

3) светофильтры СС-4, СС-8;

4) опак-иллюминатор ОЙ-17 или ОИ-18;

5) предметные и покровные обезжиренные стекла;

6) флуоресцирующие антиларвейные и ангиальвейные сыворотки и контрольная кроличья люминесцирующая сыворотка;

7) спирт этиловый и метиловый;

8) забуференный физиологический раствор (фосфатный буфер);

9) забуференный глицериновый раствор (глицериновый буфер);

10) нефлуоресцирующее иммерсионное масло;

11) иммерсионные жидкости (для работы с иммерсионными объективами пользуются специальными нефлуоресцирующими жидкостями, которые прилагаются к люминесцентному микроскопу, а при отсутствии их можно использовать диметилфталат);

б) глицериновый буфер готовят смешиванием 9 частей нейтрального глицерина и 1 части фосфатного буфера с рН 8,0;

в) фиксацию препаратов проводят этиловым или метиловым спиртом;

г) для промывания препаратов применяют фосфатный буфер с рН 7,4;

д) фосфатный буфер готовят путем смешивания 30 мл 1/15 М раствора однозамещенного фосфорнокислого натрия или калия и 120 мл 1/15 М раствора двузамещенного фосфорнокислого натрия и 8,78 г хлористого натрия в 1 л дистиллированной воды;

е) жидкий мед предварительно тщательно перемешивают и берут пробу, пробы из засахаренного меда отбирают щупом с разной глубины;

ж) от сотового меда берут пробу весом 30 г и, удаляя забрус, погружают в 15- 20 мл стерильного физиологического раствора для полного растворения меда в ячейках сотов;

з) навеску меда 15-20 г помещаю г в стерильную колбочку и добавляют 25-30 мл стерильного физраствора (температура 35-40 °С). Растворенный мед центрифугируют в течение 15 минут при 2000 об/мин. Надосадочную жидкость осторожно сливают, к центрифугату снова добавляют 25-30 мл стерильного физраствора, взбалтывают и еще раз центрифугируют. Из полученного центрифугата параллельно делают 2 мазка, один из которых окрашивают по Грамму, другой на споры — 2%-ным раствором карболового фуксина. Для обнаружения Вас. larvae центрифугат высевают на мясо-пептонный сывороточный агар (среда Томешеца) и для Вас. alvei, Strep, apis на МПА и МПБ. Выросшую культуру возбудителя идентифицируют согласно общепринятым бактериологическим методам.

и) в тех случаях, когда из-за низкого инфицирования меда выделить возбудителей бактериологическим методом не удается, применяют метод флуоресцирующих антител с использованием антиларвейной и антиальвейной сывороток. Для этого берут 15-20 г меда и растворяют в 25-30 мл физиологического раствора и центрифугируют. Из центрифугатов делают мазки, фиксируют этиловым спиртом в течение 15 минут, высушивают на воздухе, затем увлажняют фосфатным буфером с рН 7,4 и снова высушивают. Препараты окрашивают прямым способом. Для этого на мазок наносят каплю соответствующей флуоресцирующей сыворотки, помещают в чашку Петри с влажным тампоном ваты и выдерживают при температуре 37 °С в течение 35-45 минут. Окрашенные мазки промывают тем же буферным раствором, дважды сменяя раствор через 20 минут, и ополаскивают дистиллированной водой. На высушенные мазки наносят каплю буферного глицерина, покрывают тонким покровным стеклом, на которое наносят нефлуоресцирующее иммерсионное масло, и просматривают под люминесцентным микроскопом МЛ-2 по общепринятой методике;

к) степень свечения микробных клеток оценивают по четырехбалльной системе:

1) + + + + сияющее золотисто-зеленоватое свечение палочек и спор Вас. larvae с ярко выраженными контурами микробных клеток;

2) + + + яркое зеленоватое свечение палочек и спор с четко выраженными контурами;

3) + + умеренное зеленовато-желтоватое свечение клеток и спор с отчетливыми контурами;

4) + слабое сероватое свечение микробных клеток и спор с неясными контурами;

5) — клетки незаметные или в виде серых теней. Оценивают

степень свечения большинства клеток. В контроле с чистой культурой Вас. larvae, окрашенной флуоресцирующей антиларвейной сывороткой, свечение должно быть + + + +; при окраске препаратов, приготовленных из центрифугатов меда антиальвейной флуоресцирующей сывороткой, свечение должно быть + + и +.

л) мед, инфицированный возбудителями гнильцовых болезней пчел, после автоклавирования при температуре 120 °С в течение 20 минут может быть использован для кормления пчел, или его направляют в кондитерскую промышленность.

Приложение № 2

к Правилам ветеринарно-санитарной экспертизы меда в Приднестровской Молдавской Республике

Форма этикетки

8 см

			Лаборатория ветеринарно-санитарной экспертизы на рынке г. _______________________________________________________ Фамилия продавца ________________________________________________ Наименование продукта ___________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________ Количество мест ___________________________________________________ Экспертиза № _____________________________________________________ Выпущено в продажу _______ _______________________________________ (дата, время) Срок реализации __________________________________________________ __________________________________________________________________ подпись                                              Ф.И.О.

 

 

 

 

 

 

 

5 см

Приложение № 3

к Правилам ветеринарно-санитарной экспертизы меда в Приднестровской Молдавской Республике

Государственная лаборатория ветеринарно-санитарной

экспертизы

______________________________________ рынка

«____» ________________ 200__г.

Акт № _________

о недопущении к реализации продукции

 

Настоящий акт составлен:

заведующим лабораторией рынка_______________________________________________

                                                                   (Фамилия, Имя, Отчество)

ветеринарным врачом _________________________________________________________

                                                                (Фамилия, Имя, Отчество)

лаборантом__________________________________________________________________

                                                              (Фамилия, Имя, Отчество)

В присутствии представителя администрации рынка _______________________________

                                                                          (Фамилия, Имя, Отчество)

владельца (поставщика) продукции ______________________________________________

                                                                           (Фамилия, Имя, Отчество)

____________________________________________________________________________

(наименование юридического лица Ф.И.О. физического лица, адрес)

____________________________________________________________________________

что при ветеринарно-санитарной экспертизе ______________________________________

____________________________________________________________________________

(наименование товара, дата изготовления, № партии, вес)

____________________________________________________________________________

ветеринарный документ от ___________________________ № _______________________

кем выдан ___________________________________________________________________

Обнаружено _________________________________________________________________

____________________________________________________________________________

 

Заключение:

В соответствии с _____________________________________________________________

(название нормативно-правового акта)

____________________________________________________________________________

продукция___________________________________________________________________

(наименование)

количество __________________________ признанная _____________________________

____________________________________________________________________________

подлежит ___________________________________________________________________

(принятый метод уничтожения, утилизации, денатурации и др.)

____________________________________________________________________________

 

Подписи:

1. Заведующий лабораторией рынка _____________________________________________

2. Ветеринарный врач _________________________________________________________

3. Лаборант __________________________________________________________________

4. Представитель администрации рынка __________________________________________

5. Владелец (поставщик) продукции _____________________________________________