Ветеринарно-санитарные правила бактериологического исследования кормов

 

1. Область применения

 

1. Настоящие Правила обязательны для выполнения на всей территории Приднестровской Молдавской Республики исполнительными органами государственной власти, организациями, независимо от их организационно-правовых форм и форм собственности, должностными лицами и гражданами, в том числе индивидуальными предпринимателями.

2. Отбор проб и составление среднего образца

2. Настоящие правила регламентируют единые методы бактериологического исследования кормов животного и растительного происхождения, комбикормов и рыбной муки.

3. Отбор проб для бактериологического исследования при наличии затаренной продукции проводят согласно следующей таблицы:

Объём партии в упаковочных единицах

Отбор проб

До 10

От каждой упаковочной единицы

От 10 до 100

От 10 упаковочных единиц

От 101 и свыше

От 10 упаковочных единиц и дополнительно по 3 из каждых 100 упаковочных единиц

Примечание. 1 мешок = 1 упаковочной единице.

4. При наличии незатаренной продукции пробы берут не менее чем из 20 мест однородной партии со всей площади насыпи. Пробы можно отбирать в том же количестве с периодическими интервалами при погрузке и выгрузке из транспортных средств и бункеров.

5. Однородной партией считается количество корма, которое изготовляется по единой технологии в одну смену, затаренное в мешки или в незатаренном виде (насыпью) и доставленное одним видом транспорта.

6. Отбор проб проводят сухим, стерильным пробным щупом. После взятия проб от каждой партии пробный щуп очищают и дезинфицируют. Масса первичной пробы должна быть не менее 100 г.

7. Для бактериологического исследования от каждой партии корма составляют два средних образца весом не менее 500 г. Один из них направляют в лабораторию, а другой сохраняют в организации до окончания исследования.

8. Для упаковки средних образцов применяют стерильную пластмассовую или стеклянную тару.

9. Об отборе проб ветеринарные специалисты Государственной ветеринарной службы Приднестровской Молдавской Республики составляют акты в двух экземплярах. Акты должны содержать следующие данные: название организации, вид продукции, объем (масса) партии, вид упаковки (тары), дату изготовления и дату отбора проб.

3. Методы бактериологического исследования

10. Определение количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ).

11. Из среднего образца (500 г) отвешивают на лабораторных весах навеску массой 50 г и помещают в гомогенизатор, содержащий 450 мл стерильного забуференного раствора пептонной воды или стерильного физиологического раствора, либо, навеску помещают в стерильную ступку, добавляют 450 мл выше указанного раствора и тщательно перемешивают, получая основное десятикратное разведение. После отстаивания в течение 10 – 15 мин из надосадочного слоя берут стерильной пипеткой 1 мл жидкости, вносят в пробирку с 9 мл пептонной воды или стерильного физиологического раствора и получают последующие разведения 1:100; 1:1000; 1:10000; 1:100000; 1:1000000. После оседания взвешенных частиц из верхнего слоя жидкости делают по два параллельных различных по объёму посевов, взятых с таким расчётом, чтобы на чашках выросло от 30 до 300 колоний.

12. Стерильной пипеткой содержимое пробирки одного разведения тщательно перемешивают продуванием, отбирая 2 мл испытуемой взвеси, и переносят по 1 мл в стерильные чашки Петри, слегка приоткрывая крышку. Аналогично проводят посев и с последующими разведениями.

13. Не позднее чем через 15 мин к внесённой в чашки Петри испытуемой взвеси добавляют по 12 – 15 мл стерильного, расплавленного на водяной бане и охлаждённого до 44 — 45°С мясопептонного агара. Края колбы или бутылки с агаром обязательно фламбируют над спиртовкой или горелкой. Добавленный агар быстро смешивают, осторожно наклоняя чашку или вращая её по поверхности стола, чтобы засеянный материал равномерно распределился в агаре. Необходимо предотвратить образование пузырьков воздуха, следить, чтобы не оставались незасеянные участки дна чашки Петри, среда не попадала на края и крышки чашки.

14. Для предотвращения роста на поверхности агара спорообразующих микробов и бактерий группы протея Н- формы рекомендуется наслоить расплавленный и охлаждённый голодный агар в количестве 1/3 объёма первоначально внесённой в чашку среды. В результате образуется слой толщиной 3 – 4 мм.

15. После застывания агара чашки Петри перевёртывают и помещают в термостат при 30°С на 72 ч или на 37°С – 48 ч, просматривая засеянные бактериологические чашки каждый день. Через 48 – 72 ч подсчитывают общее количество колоний бактерий, выросших на поверхности и в глубине агара, при помощи лупы с 5-кратным увеличением или специальным прибором. Для этого бактериологическую чашку кладут дном вверх на чёрный фон и каждую колонию отмечают тушью или чернилами для стекла, чтобы не сосчитать её повторно.

16. При определении количества МАФАнМ в 1 г корма подсчитанное количество колоний умножают на степень разведения анализируемого корма по каждым двум чашкам Петри одного разведения и двум чашкам другого разведения, и выводят среднее арифметическое результатов подсчёта.

Например: в чашке Петри с разведением 0,001 выросло 30 колоний, в чашке Петри с разведением 0,0001 — 15 колоний. Суммируют выросшие колонии с двух параллельных бактериологических чашек одного разведения и делят на 2. Полученная сумма — среднее арифметическое число. Аналогично суммируют выросшие колонии и с двух параллельных чашек другого разведения. Среднее арифметическое число колоний умножают на степень разведения и получают количество МАФАнМ в 1 г испытуемого корма. Следовательно, 1 г корма содержит:

60 : 2 = 30 х 103 = 3,0 х 104

30 : 2 = 15 х 104 = 1,5 х 105

18. Навеску исследуемого материала (корма) 25 г от средней пробы вносят во флакон Сокслета или колбу, содержащую 225 мл среды предварительного обогащения (забуференный раствор пептонной воды или стерильного раствора, либо мясопептонного бульона (МПБ) с содержанием 5% маннита). Соотношение материала и среды 1:5. Содержимое колбы тщательно перемешивают и помещают в термостат при температуре 37°С. Через 24 часа производят пересев на 2 (по выбору) основные среды обогащения (селенитовый бульон, магниевую среду, среды Киллиана, Мюллера, Кауфмана) в соотношении 1:10. Для этого из флакона (колбы) отбираем 10 мл испытуемой взвеси и вносим во флакон (колбу) со 100 мл основной среды обогащения (по выбору) и ставят в термостат при температуре 37°С на 16 – 18 ч. После 16 – 18 ч термостатирования из основных сред обогащения с испытуемой взвесью бактериологической петлей производят посевы в чашки Петри с твердыми дифференциально-диагностическими средами висмут-сульфит агар, среды Плоскирева или Левина (по 2 чашки), которые помещают в термостат при 37°С.

20. На висмут-сульфит агаре (ВСА) S. typhi и S. paratyphi A растут в виде мелких, нежных, серовато-зеленых колоний с черным центром; S. Cholerae suis — в виде зеленых колоний. Колонии других сальмонелл значительно крупнее, тёмно-коричневого цвета с металлическим блеском, окруженные светлым ореолом, цвет участка среды под колонией черный.

21. На среде Плоскирева сальмонеллы растут в виде прозрачных или нежно-розовых колоний, на среде Левина — прозрачные, бледные, нежно-розовые или розовато-фиолетовые колонии.

22. В случае обнаружения колоний, подозрительных на сальмонеллы, 3-5 из них засеивают на комбинированные среды: Ресселя, Крумвиде-Олькеницкого в модификации Ковальчука или на трехсахарную (лактоза, глюкоза, сахароза) «скошенный столбик» с мочевиной.

23. Высев колоний из чашек также делают на короткий пестрый ряд, включающий скошенный агар и среды Гисса с лактозой, глюкозой и сахарозой, а также на бульон Хоттингера для определения индола и сероводорода (в этих целях под пробку пробирки с бульоном вкладывают специальные индикаторные бумажки). Для определения подвижности культуры производят посев уколом в полужидкий агар (0,3- 0,5%).

24. На среду Ресселя и «скошенный столбик» посевы делают сначала штрихом на скошенной поверхности, а затем уколом в глубину столбика. При разложении лактозы косая поверхность окрашивается в синий цвет (при индикаторе ВР). При разложении одной глюкозы окрашивается только столбик среды и происходит разрыв агара со скоплением в нем пузырьков газа. При разложении мочевины в «скошенном столбике» окраска среды меняется на оранжевую при индикаторе ВР и на коричнево-фиолетовую при индикаторе тимоловый синий в сочетании с индикатором Андраде. Посевы выдерживают в термостате при температуре 37°С 16-18 часов.

25. Культуры, ферментирующие лактозу, глюкозу и сахарозу с образованием газа и расщепляющие мочевину, отбрасывают. Культуры, не ферментирующие лактозу и сахарозу и не расщепляющие мочевину, подлежат дальнейшему исследованию. Изучают морфологию культуры в мазке, окрашенном по Грамму, и подвижность (в висячей или раздавленной капле или в полужидком агаре).

26. Культуры грамотрицательных подвижных палочек, ферментирующие глюкозу с образованием газа, не ферментирующие лактозу и сахарозу, не разлагающие мочевину и не образующие индол, подвергаются серологическому исследованию в реакции агглютинации на предметном стекле с набором агглютинирующих сывороток.

27. Для реакции агглютинации используют культуры, выращенные на среде Ресселя или на двухсахарном или трехсахарном агарах. При этом для реакции агглютинации с О- сыворотками культуру следует брать из верхней части скошенного агара, а для агглютинации с Н- сыворотками — из самой нижней части (конденсационной воды), где микробы наиболее подвижны.

28. Исследование культуры начинают реакцией агглютинации с поливалентной адсорбированной О- сывороткой основных серологических групп А, В, С, D, Е.

29. На предметное стекло наносят каплю, сыворотки и культуры, тщательно смешивают и в течение 2 минут наблюдают склеивание (агглютинацию) частиц. Культуры, дающие положительную реакцию агглютинации с поливалентной сывороткой, также проверяют с монорецепторными агглютинирующими сыворотками. Сначала с помощью монорецепторных О- сывороток устанавливают принадлежность культур к той или иной серологической группе. Установив серологическую группу, к которой отнесена данная культура, последнюю проверяют монорецепторными Н- сыворотками сначала первой фазы, а потом второй, определяя таким образом серологический тип бактерий в соответствии со схемой Кауфмана-Уайта.

30. Обнаружение подвижных (кроме S. pullorum и S. gallinarum) грамотрицательных палочек, дающих характерный рост на элективных средах, нефермерментирующих лактозу и сахарозу, сбраживающих глюкозу и манит до кислоты и газа (S. typhi suis не ферментирует манит), образующих сероводород и не образующих индол, дающих положительную реакцию агглютинации с монорецепторными О- и Н- сальмонеллёзными сыворотками, указывает на наличие бактерий из рода сальмонелл.

31. Определение присутствия энтеропатогенных типов кишечной палочки.

32. Из разведений, которые указаны в пункте 11 Правил берут по 1мл каждого разведения, вносят (по выбору) в стерильные пробирки, содержащие по 5 мл среды: Кесслер, Кода, «ХБ», Хейфеца стерильной пипеткой с широким концом вместимостью 5 — 10мл.

33. Посевы помещают в термостат при температуре 43 Кесслера, «ХБ», Хейфеца и 37°С для среды Кода.

34. Через 18-20 ч. учитывают (муть), образование кислоты и газа в поплавке, на среде Кода — изменение цвета в желтый (кислота, муть), «ХБ» — в желтый цвет, среда Хейфеца — в салатно-зеленый цвет.

35. Из пробирок со средами Кесслера и Хейфеца, где наблюдается рост микробов производят посев бактериальной петлей на дифференциально-диагностические среды: Эндо, Плоскирева, Левина разделенные на сектора для каждого разведения и помещают в термостат при 37°С на 18 – 20 ч.

36. Специфическая изменение сред «ХБ» и Кода не требует дальнейшего подтверждения.

37. Типичные колонии E.coli характеризуются круглой формой, гладкой, выпуклой или слегка приподнятой в центре поверхностью, ровными краями (S- форма), розового, темно-красного или малинового цвета с металлическим блеском или без него на среде Эндо, на среде Плоскирева — кирпично-красные с глянцевой поверхностью и на среде Левина — темно-фиолетовые или фиолетово-черные блестящие колонии. Из подозреваемых колоний готовят мазки, окрашенные по Грамму: при микроскопии обнаруживают грамотрицательные палочки различной величины.

38. Выросшие изолированные колонии S- формы (не менее 4) пересеивают на МПБ, выдерживают в термостате при температуре 37°С в течение 16-24 ч. После этого одну часть пробирок используют для приготовления мазков, посева на дифференциально-диагностические среды, заражение белых мышей; вторую — для приготовления автоклавированного антигена, если кипяченый антиген не буде агглютинироваться поливалентными (комплексными) коли- сыворотками.

39. У выделенных культур определяют морфологические и культурально-биохимические свойства с целью проведения их родовой дифференциации, как указано в Приложении № 1 к настоящим Правилам.

40. Морфологию бактерий изучают в мазках окрашенных по Грамму, подвижность определяют по характеру роста в 0,3% полужидком МПА.

41. Для определения культурально-биохимических свойств бактерий используют набор питательных сред, куда входят среды с углеводами и индикатором Андраде (лактоза, глюкоза, сахароза, маннит, дульцит, адонит, инозит), среда Кларка, цитратно-аммонийная среда, МПЖ, среда с мочевиной, МПБ или бульон Хоттингера и агар с глюкозой и сернокислым железом.

42. Патогенные свойства кишечной палочки определяют путем постановки биологической пробы на белых мышах. С этой целью внутрибрюшинно заражают трех мышей массой 14-16 г смывом с суточных агаровых культур, в дозе 500 млн. микробных тел. Концентрацию бактерий устанавливают по бактерийному стандарту. Культуру признают патогенной в случае гибели одной или более мышей в первые четверо суток после заражения.

43. Одновременно с определением морфологических, культурально-биохимических и патогенных свойств бактерий проводят серологическую типизацию культур кишечной палочки по О- антигену с целью установления энзоотических типов.

44. Для приготовления антигена каждую предназначенную для типизации суточную агаровую культуру (пробирка со скошенным агаром) смывают стерильным физиологическим раствором, доводят суспензию бактерий до концентрации 5-6 млрд./мл и кипятят в водяной бане в течение 1 часа. Уровень воды должен быть выше уровня культуры в пробирках.

45. На чистое обезжиренное стекло наносят пастеровской пипеткой по капле каждой комплексной О- сыворотки, разведенной физиологическим раствором 1:5, и по капле исследуемого антигена. Затем хорошо перемешивают стеклянной палочкой или бактериологической петлей. Реакция протекает при комнатной температуре в течение 3 минут при покачивании стекла.

46. В том случае, когда антиген агглютинируется всеми комплексными сыворотками, его проверяют с физиологическим раствором для исключения самоагглютинации. Самоагглютинирующие антигены для серотипизации непригодны.

47. Антигены, давшие четко выраженную агглютинацию на стекле с комплексной колисывороткой, исследуют в капельной реакции агглютинации (РА) с отдельными разведенными 1:10 типоспецифическими сыворотками, входящими в состав комплексной сыворотки.

48. Если антиген из исследуемой культуры агглютинируется в капельной РА с одной или двумя — тремя моносыворотками, то его проверяют с этими же сыворотками в пробирочной РА, так как реакция на стекле имеет лишь ориентировочное значение.

49. Для постановки пробирочной РА типоспецифические О- сыворотки, агглютинирующие антиген из исследуемой культуры в РА на стекле, разводят физиологическим раствором. Начиная с 1:100 до предельного титра сыворотки, указанного на этикетке, и во все пробирки добавляют по 2 капли антигена (концентрация 5-6 млрд. бактериальных тел по бактерийному стандарту), приготовленного из убитой нагреванием агаровой культуры обнаруженных бактерий.

50. Одновременно ставят контроли:

а) антиген + физиологический раствор (для исключения самоагглютинации);

б) сыворотка, разведенная 1:100, без антигена (для исключения явления флоккуляции).

51. Штатив с пробирками встряхивают и ставят в термостат при 37°С на 12-16 часов, затем выдерживают при комнатной температуре 18-24 часа. Реакцию учитывают с помощью лупы или агглютиноскопа. Принадлежность к О- группе определяют по наивысшему разведению типоспецифической агглютинирующей сыворотки, вызывающей агглютинацию антигена исследуемой культуры, которое должно быть не ниже половины предельного титра типоспецифической сыворотки. Сыворотка и антиген в контроле не должны образовывать хлопьев.

52. Если все комплексные О- коли- сыворотки в капельной реакции не агглютинируют антиген из убитой нагреванием культуры, то готовят из этого штамма суспензию бактерий и автоклавируют ее при давлении пара 1 атмосфера (120°С) в течение 2 часов для разрушения термостабильного А- антигена. Автоклавированный антиген исследуют с сыворотками 08, 09, 0101 ( пункты 43; 44 Правил).

53. При наличии агглютинации дают заключении о присутствии в исследуемом корме энтеропатогенных типов E. coli.

54. Кроме этого энтеропатогенными признают культуры E. coli., которые:

а) серологически типизируются набором типоспецифических коли- сывороток, но не вызывают гибель белых мышей;

б) серологически не типизируются, но вызывают гибель белых мышей.

55. Определение присутствия анаэробов из рода клостридий.

56. 50г корма растирают в стерильной ступке с физиологическим раствором и засевают в несколько пробирок со средой Китта-Тароцци, молоком и по две чашки со средами Вильсона-Блера и кровяным агаром по Цейслеру. Для уничтожения вегетативных форм по одной пробирке с жидкими средами прогревают при температуре 80°С в течение 20 минут. Посевы помещают в термостат, при температуре 37°С. Чашки должны находиться в специальных аппаратах для анаэробных культур или в эксикаторе, куда заранее вносят тот или иной поглотитель кислорода.

57. Результаты посевов регистрируют в первый же день. Почернение среды Вильсона-Блера в течение 1-3 часов после посева, свертывание молока с образованием ноздревато-губчатого сгустка и прозрачной сыворотки в течение 6 часов, а также быстрое начало роста на среде Китта-Тароцци (через 4-5 часов) при обильном газообразовании является характерным для клостридиум перфрингенс.

58. Рост клостридиум ботулинум, наблюдаемый обычно на 2-3-й день, характеризуется помутнением среды Китта-Тароцци, образованием осадка и запахом прогорклого масла.

59. При обнаружении роста на среде Китта-Тароцци производят микроскопическое исследование и выделение чистой культуры посевом на 2-3 чашки с кровяным агаром по Цейслеру, которые выдерживают в анаэробных условиях при температуре 37°С в течение 24-48 часов, после чего просматривают рост в чашках и отбирают культуры, которые классифицируют по морфологическим и биохимическим свойствам, указанным в приложении № 2; 3.

60. Биологическую пробу проводят на морских свинках или белых мышах путем внутрибрюшинного заражения бульонной культурой. При положительном результате подопытные животные гибнут через 12-48 часов.

61. Для идентификации отдельных возбудителей или типов одного вида ставят опыт нейтрализации токсина специфической сывороткой. Для этого минимальную смертельную дозу культуры в смеси с 0,2-0,5 мл соответствующей типоспецифической сыворотки выдерживают в термостате 45 минут и вводят мышам внутрибрюшинно. Для контроля испытуемую культуру или фильтрат вводят мышам без сыворотки. Вид и тип микроба определяют по выживаемости мышей, получивших соответствующую сыворотку.

62. При исследовании кормов на ботулизм (наличие токсинов) в качестве подопытных животных используют белых мышей. При этом могут быть применены два способа:

а) нейтрализация токсина противоботулиновой сывороткой (антитоксином). Корм предварительно растирают в ступке со стерильным физиологическим раствором (1:4) и настаивают в течение 1-2 часов при комнатной температуре. Настой центрифугируют и фильтруют через ватно-марлевый фильтр. К 0,5 мл фильтрата добавляют 0,2 мл поливалентной противоботулиновой сыворотки. Смесь выдерживают 1 час при комнатной температуре, затем одному животному вводят подкожно 0,5 мл фильтрата, другому — смесь фильтрата с сывороткой в той же дозе. Аналогичное исследование может быть проведено с 6-7-суточной культурой, выращенной на печеночном бульоне. В этом случае пастеровской пипеткой отсасывают верхний слой культуры, который фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Далее поступают, как указано выше;

б) разрушение токсина кипячением фильтрата. Фильтрат готовят, как указано в подпункте «а» пункта 62 Правил. Одну половину фильтрата кипятят в течение 30 минут. Затем одному животному внутрибрюшинно вводят 0,5-1,0 мл некипяченого фильтрата, другому — в этой же дозе прокипяченного.

63. Положительным результатом биологической пробы по первому и второму способам считают гибель мышей, наступившую как от фильтрата, не обработанного противоботулиновой сывороткой, так и от фильтрата, не подвергнутого кипячению.

64. Определение присутствия бактерий из группы протея.

65. Из разведений (пункт 11 Правил), на наличие в корме протея в Н- форме, берут по 0,5 мл анализируемой взвеси и вносят в конденсационную воду свежескошенного мясопептонного агара, разлитого в широкие пробирки, не касаясь поверхности среды (метод Шукевича). Вертикально поставленные пробирки помещают в термостат при 37°С. Через 18 – 24 ч отмечают образование ползучего вуалеобразного налёта с голубым оттенком. На скошенном мясопептонном агаре культура поднимается из конденсационной жидкости вверх по поверхности среды. При появлении характерного роста микробов рода протея микроскопируют окрашенные по Грамму мазки и изучают подвижность микробов в раздавленной или висячей капле.

66. Для обнаружения нероящихся О- форм можно проводить посев на поверхности агара Плоскирева. О- формы протея растут на этой среде в виде прозрачных колоний, слегка подщелачивающих среду, окрашивая её в жёлтый цвет. Затем, колонии пересевают бактериальной иглой среду Крумвиде-Олькеницкого в модификации Ковальчука, которая при наличии бактерий из группы протея окрашивается в ярко-красный цвет (вследствие расщепления мочевины). В результате выделения сероводорода может образовываться чёрный осадок с возможным разрывом агарового столбика.

67. Идентификацию протея проводят по морфологическим признакам (это грамотрицательные палочки), способности к гидролизу мочевины и образованию сероводорода. Дополнительно изучают ферментацию глюкозы (положительный результат), лактозы и маннита (отрицательный результат), подвижность в висячей или раздавленной капле, либо проводят посев уколом в столбик полужидкой среды (Приложение № 1 к Правилам).

68. Обнаружение полиморфных грамотрицательных палочек, подвижных, образующих характерный ползучий рост на скошенном мясопептонном агаре (по Шукевичу), сбраживающих глюкозу и мочевину, неферментирующих лактозу и манит, указывает на наличие в исследуемом корме бактерий из рода протея.

4. Оценка кормов

69. Комбикорм используют сельскохозяйственным животным при отрицательных результатах исследования на сальмонеллы, энтеропатогенные типы кишечной палочки и токсинообразующие анаэробы при условии его соответствия другим показателям действующих стандартов.

70. Мясокостную и рыбную муку используют сельскохозяйственным животным при общей бактериальной обсемененности не более 500 тысяч микробных тел в 1 г и отрицательных результатах исследования на сальмонеллы, энтеропатогенные типы кишечной палочки и протея, а также токсинообразующие анаэробы при условии соответствия другим показателям действующих стандартов.

71. При обнаружений сальмонелл, энтеропатогенных типов кишечной палочки и протея корм запрещается использовать животным без дополнительной обработки. Вторичную стерилизацию проводят в соответствии с технологическими режимами производства этих кормов или же этот корм подвергается проварке при температуре не ниже 100°С в течение 1 часа и дальнейшей обработке согласно установленному технологическому режиму приготовления кормов к скармливанию.

72. При установлений в кормах анаэробных микроорганизмов и их токсинов такие корма запрещается использовать животным без дополнительной термической обработки, которую проводят при температуре 120 – 1300С в течение 2 часов. После стерилизации корма подвергают бактериологическому исследованию с постановкой биопробы на наличие анаэробов и их токсинов и при получении отрицательных результатов они могут быть использованы на кормовые цели. При положительных результатах исследования эти корма уничтожают.

73. Корма, производство которых связано с тепловой обработкой, имеющие бактериальную обсемененность свыше 500 тысяч микробных клеток в 1 г, при отсутствии патогенных микроорганизмов подлежат повторной стерилизации согласно технологическим инструкциям или могут быть направлены для производства гранулированных кормов с термической обработкой, а также проварке, (пункт 70 настоящих Правил).

74. Мясные и мясорастительные консервы (группа А), предназначенные для непродуктивных животных, оценивают по каждой упаковочной единице отдельно в соответствии с ГОСТ 30425-97, утверждённым Приказом Министерства промышленности Приднестровской Молдавской Республики от 24 сентября 2002 года № 382 «О введении в действие Государственных стандартов Приднестровской Молдавской Республики»(рег. № 1796 от 3 октября 2002 года) (САЗ 02-40).

5. Контроль и ответственность

75. По окончании бактериологического исследования кормов ветеринарными специалистами Государственной ветеринарной службы составляется отчёт о результатах исследования.

76. Контроль за выполнением настоящих Правил возлагается на Государственную ветеринарную службу и иные органы государственной власти Приднестровской Молдавской Республики в пределах компетенции, установленной законодательством Приднестровской Молдавской Республики.

77. Ответственность за проведением Ветеринарно-санитарных правил бактериологических исследований кормов несут работники лаборатории.

78. Ответственность за нарушение Ветеринарно-санитарных правил бактериологических исследований кормов и выдачу результатов несут заведующие отделами и заведующие лабораториями.

Приложение № 1

к Ветеринарно-санитарным правилам

бактериологичекого исследования кормов

в Приднестровской Молдавской Республике

Основные дифференциальные признаки бактерий семейства Enterobakteriaceae

 

Биохими-

ческие

показатели

Еshe-

richia

(Е. coli)

escherichia (e. coli)

Сitro-

bacter

(С. fre-

undii)

Кlebsiel-

la

Еnterobacter

Рroteus

Salmo-

nella

Е.cloa-cee

Е.aerogе-

nes

Е.liqu-

ifaciens

Р.vulga-

ris

Р.mira-

bilis

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

подвижность

+/-

+ реже-

+

+

+

+

+

+ реже-

сахароза

+

+

+

+

+

+

+

+

лактоза

+/-

+/-

+

+

+

(+)

глюкоза

+/-

+/-

+

+

+

+

+

+/-

+

маннит

+

+

+

+

+

+

+

дульцит

+/-

+/-

+/-

+/ —

адонит

+

+/ —

+

инозит

+/-

+

+

(+)

+/ —

индол

+ реже-

-/+

+

сероводород

— реже+

+

+

+

+ реже-

реакция с метилротом

+

+

+/-

+

+

+

реакция фогес- проскауэра

+

+

+

+/-

+/-

усвоение цитратных и аммонийных солей

-/(+)

(+)

+

+

+

разложение мочевины

(+)

+/-

+

+

+

разложение желатины

+/-

Обозначения: + положительный результат через 24-48 часов;

— отрицательный результат;

(+) положительная реакция выражена слабо;

+/- может быть положительная реакция или отрицательная.

Приложение № 2

к Ветеринарно-санитарным правилам

бактериологического исследования кормов

в Приднестровской Молдавской Республике

 

Морфологические и культуральные свойства анаэробов

 

Наименование

Длина,

Микро-

метров

Ширина,

Микро-

метров

Подвиж-

ность

Капсуло-

образова-

ние

Споро-

образование

Поверхностные колонии

на кровяном агаре

1

2

3

4

5

6

7

Cl. septikum

2-10

0,8-1,1

+

Через 24-48 часов

Вуалевые с бахромчатыми краями и нежными отростками, бесцветные, незначительный гемолиз

Cl. oedematiens

5-10

1,1-1,5

+

Через 48 часов

Круглые, асбестовые или

корневидные, бесцветные или серые, гемолиз

Cl. hystoliticum

2-5

0,5-0,8

+

Через 24 часа

Мелкие, круглые, гладкие,

бесцветные или серые, без

зоны гемолиза

Cl. perfringens

4-8

1,0-1,5

В организме животного и на свёрнутой сыворотке

Образуется только

в средах, богатых белком

Округлые, выпуклые, продолговатые, сочные от серого до зелёного цвета, окружены большой зеленовато-коричневой

зоной гемолиза

Cl. botulinum

4-9

0,5-1,2

+

Через 24-48 часов

Круглые или неправильной формы, с отростками, исходящими из мотка «переплетённых ниток», окруженных зоной гемолиза

Примечание: + положительный результат; — отрицательный результат.

Приложение № 3

к Ветеринарно-санитарным правилам

бактериологического исследования кормов

в Приднестровской Молдавской Республике

Ферментативные свойства патогенных клостридий

 

Наименование

Молоко

Желатин

Мозговая среда

Свёрнутая

сыворотка

1

2

3

4

5

Cl. septikum

Cl. oedematiens

Cl. hystoliticum

Cl. perfringens

Сl. botulinum

Медленное

свёртывание

(2-5 дней), запах

кислый

Медленное свертывание

(4-10 дней)

Свёртывается

через одни сутки

Бурное свёртывание

(4-6 часов).

Газообразование

бурное, сыворот-

ка прозрачная

Пептонизируется

Разжижение через 3-5 дней

Разжижение через 3-5 дней

Разжижается

быстро

Разжижение

на 3-5 день

Разжижается

Нет почернения

Нет почернения

Почернение

через 3-6 дней

Нет почернения

Чернеет

медленно и слабо

Не разжижается.

Инволюционные

формы, споры

Не разжижается.

Инволюционные

формы, споры

Разжижается

медленно

Не разжижается.

Инволюционные

формы, споры

Разжижается