Ветеринарно-санитарные правила по лабораторной диагностике трихинеллеза животных

1. Область применения

1. Настоящие Правила обязательны для выполнения на всей территории Приднестровской Молдавской Республики государственными органами, иными организациями, хозяйственными субъектами независимо от их принадлежности и форм собственности, должностными лицами, гражданами, в том числе индивидуальными предпринимателями в области лабораторной диагностики трихинеллеза животных.

2. Общие положения

2. Трихинеллез — опасный антропозоогельминтоз, вызываемый трихинеллами двух видов: Trichinella spiralis и Trichinella pseudospiralis, протекает остро и хронически. Весь цикл развития обоих видов проходит в организме одного хозяина — половозрелая стадия локализуется в кишечнике, личиночная — в мышечной ткани.

3. Трихинеллезом болеют свиньи, кабаны, медведи, другие всеядные и плотоядные (собаки, волки, лисы), морские млекопитающие (киты, тюлени, моржи), насекомоядные, грызуны и другие животные.

4. Перерабатывающие организации, фермерские хозяйства, физические, юридические лица, в том числе индивидуальные предприниматели, осуществляющие производство, переработку, хранение, реализацию, экспортно-импортные операции, транспортировку туш, полутуш, четвертин свиней (кроме поросят до 3-недельного возраста), кабанов, барсуков, медведей, всеядных и плотоядных животных, а так же нутрий, обязательно должны подвергать их исследованию на трихинеллез.

5. При послеубойной диагностике трихинеллеза используют два метода исследования: микроскопический (компрессорный) и биохимический (метод переваривания), прижизненную диагностику осуществляют методом иммуноферментного анализа (ИФА). Мясо и субпродукты животных (имеющие мышечную ткань) исследуют микроскопическим или биохимическим методами. Шпик (с наличием мышечных прослоек) исследуют только микроскопическим методом. Исследование копченостей, импортной свинины в блоках (при выборочном контроле) и других видов продукции проводят только биохимическим методом. Диагноз на трихинеллез ставят на основании результатов лабораторных исследований.

3. Взятие и пересылка материала для исследования

6. Для исследования отбираются пробы из ножек диафрагмы (на границе перехода мышечной ткани в сухожилие), при их отсутствии — части межреберных, шейных, жевательных, поясничных, икроножных мышц, сгибателей и разгибателей пясти, а также мышцы языка, пищевода и гортани; от туш морских млекопитающих — мышцы кончика языка и глаза. Масса пробы от каждой группы мышц должна быть не менее 5 грамм, а общая масса пробы от одного животного должна составлять не менее 25 грамм.

7. Пробы шпика соленого, копченого (при наличии прослоек мышечной ткани) отбирают от каждого куска, масса пробы должна быть не менее 25 грамм.

8. Пробы копченостей отбирают от 3% упаковочных единиц, делая по 10 — 15 выемок из каждой упаковочной единицы, из которых составляют объединенную пробу.

9. Субпродукты свиные (языки, головы, ножки, хвосты) при отсутствии ветеринарного подтверждения об их происхождении от туш, подвергнутых трихинеллоскопии, исследуют следующим образом: от 3% упаковочных единиц берут по 10-15 выемок из каждой и делают объединенную пробу массой не менее 25 грамм.

10. Импортную свинину (в тушах, полутушах) исследуют не менее 10% от партии мяса, пробы берут из остатков ножек диафрагмы или межреберных мышц. Масса пробы мышц от туши, полутуши должна составлять не менее 1 грамма, общая масса пробы для исследования — не менее 25 грамм.

11. Импортную свинину в блоках исследуют не менее 1% от партии мясных блоков, пробы отбирают по 25 выемок (1 грамм каждая) от блока общей массой не менее 25 грамм.

12. Пробы упаковывают во влагонепроницаемую тару и доставляют в лабораторию в день отбора.

4. Микроскопическое исследование (компрессорная трихинеллоскопия)

13. При исследовании мяса и мясопродуктов количество срезов мышечной ткани (от 24 до 96) определяют в зависимости от эпизоотической и эпидемиологической ситуаций территории.

14. Из кусочков мышц изогнутыми ножницами по ходу мышечных волокон делают 24 среза величиной с овсяное зерно, которые помещают в середину клеточки компрессориума, накрывают вторым стеклом и завинчивают винты, раздавливая срезы так, чтобы они стали прозрачными и удобными для их качественного просмотра.

15. Срезы исследуют под малым увеличением (8:10) с помощью соответствующих приборов для трихинеллоскопии.

16. При исследовании шпика из прослоек мышечной ткани (каждого куска) делают 24 среза, помещают в чашку Петри с 0,5 см3 раствора (1% процентный раствор фуксина в 5% процентном растворе едкого натра) на 5-8 минут. Затем срезы размещают в компрессориуме и просматривают согласно пункта 14.

17. При просмотре срезов обнаруживают капсулы с личинками трихинелл, которые могут иметь лимоновидную или округлую формы, внутри капсул расположены одна или несколько спирально свернутых личинок. Личинки бескапсульных трихинелл имеют специфическую конфигурацию расположения в мышечных волокнах и их легче обнаружить по краям срезов мышц и в тканевой жидкости, окружающей срезы. Могут встречаться обызвествленные капсулы. Для их просветления срезы мышц помещают в чашку Петри с 5-10%-ным раствором соляной кислоты. Чашку ставят в термостат при температуре 37 0С на 20-30 минут. Затем срезы переносят на компрессориум и просматривают согласно пункта 14.

5. Биохимическое исследование (трихинеллоскопия после искусственного переваривания мышц)

18. При проведении исследования используют искусственный желудочный сок (ИЖС), который готовят по следующей прописи: вода водопроводная температуры 41-42 0С — 1000 см3; кислота соляная концентрированная (удельная масса 1,2) — 10 см3; пепсин пищевой свиной при исследовании свежего мяса и мясопродуктов — 2,0 грамма, при исследовании соленого, копченого мяса и мясопродуктов, шпига — 10,0 грамм. При использовании пепсина медицинского дозу увеличивают до 20,0 грамм. Искусственный желудочный сок годен для применения в течение 8 часов с момента приготовления.

19. При исследовании мяса в тушах, полутушах, четвертинах, блоках, а также копченостей (при выборочном контроле) и других видов продукции количество срезов (массу навески) определяют согласно пункта 12.

20. Навеску измельчают в мясорубке с диаметром решетки 3-4 мм, переносят в коническую колбу соответствующей вместимости и заливают искусственный желудочный сок в соотношении 1:15. Колбу помещают в термостат при температуре 41-42 0С и выдерживают 5-7 часов, периодически перемешивая. За 10 минут до окончания переваривания перемешивание прекращают. После окончания переваривания в осадке остаются хлопья коричневого или темно-коричневого цвета.

21. Из колбы сливают (осторожно) 2/3 надосадочной жидкости, осадок выливают на капроновое сито (полусферической формы с диаметром ячеек 400 мкм), установленное в стеклянной воронке диаметром 90-120 мм, соединенной резиновой трубкой с пробиркой вместимостью 5 см3.

Залитый осадок отстаивают 15-20 минут, затем резиновую трубку перекрывают зажимом и пробирку отсоединяют. Содержимое пробирки (осадок) переносят по частям на часовое стекло, исследуют под малым (8:10) увеличением микроскопа или трихинеллоскопа на наличие личинок трихинелл.

22. Для выделения личинок трихинелл может быть использован метод группового переваривания.

6. Оценка результатов

23. Результаты считают положительными, если в образцах исследованной продукции обнаружена хотя бы одна личинка капсульных или бескапсульных трихинелл.

7. Дифференциальная диагностика

24. Капсулообразующих трихинелл необходимо дифференцировать от наиболее часто встречаемых в мясе и мясопродуктах саркоцист (мишеровы мешочки) и микрофинн. Дифференциация основана на морфологии возбудителя и строении капсулы;

а) трихинеллы имеют капсулу лимоновидной, округлой формы, внутри спирально свернутая личинка (или несколько личинок);

б) саркоцисты имеют собственную оболочку цилиндрической или неправильной формы; циста заключена в собственную тонкую оболочку и состоит из камер, внутри которых находятся мерозоиты;

в) микрофинны располагаются в отличие от трихинелл между мышечными волокнами, имеют овальную форму и окружены слоистой соединительно тканой оболочкой.

8. Ответственность за выполнение правил

25. Контроль за выполнением настоящих Правил возлагается на органы государственной ветеринарной службы и иные органы государственной власти в пределах компетенции установленные действующим законодательством Приднестровской Молдавской Республики.

26. Ответственность за нарушение настоящих Правил устанавливается действующими нормативными правовыми актами Приднестровской Молдавской Республики.